薄層掃描儀是可以對斑點(diǎn)行掃描的用分光光度計(jì)，用可見光或紫外光作光源，線性掃描或鋸齒掃描薄層板展開后的斑點(diǎn)，該斑點(diǎn)就吸收該組分征波長的單色光，剩余的單色光經(jīng)透射或反射或發(fā)射熒光，由檢測器積分起來，獲得這塊斑點(diǎn)面積的待測物質(zhì)含量。

　　原理

　　薄層色譜又叫薄板層析，是色譜法中的種，是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的種很重要的實(shí)驗(yàn)，屬固—液吸附色譜。它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)，方面適用于少量樣品(幾到幾微克，甚至0.01微克)的分離;另方面在制作薄層板時(shí)，把吸附層加厚加大，因此，又可用來制樣品，此法別適用于揮發(fā)性較小或較溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的質(zhì)。此外，薄層色譜法還可用來跟蹤有機(jī)反應(yīng)及行柱色譜之前的種“預(yù)試”。

　　薄層色譜(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示，又稱薄層層析，屬于固-液吸附色譜。是近年來發(fā)展起來的種微量、快速而簡單的色譜法，它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)。方面適用于小量樣品(幾到幾十微克，甚至0.01μg)的分離;另方面若在制作薄層板時(shí)，把吸附層加厚，將樣品點(diǎn)成條線，則可分離多達(dá)500mg的樣品。因此又可用來制樣品。故此法別適用于揮發(fā)性較小或在較溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物資。此外，在行化學(xué)反應(yīng)時(shí)，常利用薄層色譜觀察原料斑點(diǎn)的逐步消失來判斷反應(yīng)是否成。

　　薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板(10×3cm左右)上均勻的涂層吸附劑或支持劑，帶干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細(xì)管滴加于離薄層板端約1cm處的起點(diǎn)線上，涼干或吹干后置薄層板于盛有展開劑的展開槽內(nèi)，浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離端約1cm附近時(shí)，將色譜板取出，干燥后噴以顯色劑，或在紫外燈下顯色。

　　薄層色譜儀包括：薄層層板點(diǎn)樣器、手動(dòng)涂布臺、干燥儲(chǔ)備箱、洗板架、紫外光探測器。可以快速分離脂肪酸、類固醇、氨基酸、核苷酸、生物堿及其他多種物質(zhì)。

　　類別

　　1.離心薄層色譜儀 2.棒狀薄層色譜儀 3.手動(dòng)薄層色譜儀 4.雙波長薄層色譜掃描儀 5.自動(dòng)薄層色譜儀 6.旋轉(zhuǎn)薄層色譜儀 7.波長薄層色譜儀 8.型薄層色譜儀 9.二管陣列薄層色譜掃描儀 10.加壓薄層色譜儀 11.暗箱式薄層色譜攝影儀

　　用途

　　適用于化學(xué)、化、藥、臨床、農(nóng)業(yè)、食品、毒理等域內(nèi)的各種化合物的分離、制、定性鑒別、雜質(zhì)檢查和含量測定。

　　操作方法

　　(1) 薄層板制備 除另有規(guī)定外,將1份固定相和3份水在研缽中向方向研磨混合,

　　去除表面的氣泡后，倒入涂布器中,在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器行涂布(厚度為0.2～

　　0.3mm)，取下涂好薄層的玻板，置水平臺上于室溫下晾干，后在110℃烘30分鐘，即置

　　有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過透射光和反射光檢視)。

　　(2) 點(diǎn)樣 除另有規(guī)定外，用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上，般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底

　　邊2.0cm，樣點(diǎn)直徑及點(diǎn)間距離同紙色譜法,點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為

　　宜。點(diǎn)樣時(shí)注意勿損傷薄層表面。

　　(3) 展開 展開缸如需預(yù)用展開劑飽和，可在缸中加入足夠量的展開劑，并在壁

　　上貼二條與缸樣、寬的濾紙條，端浸入展開劑中，密封缸的蓋，使系統(tǒng)平衡或

　　按正文規(guī)定操作。

　　將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5

　　～1.0cm(切勿將樣點(diǎn)浸入展開劑中),密封缸蓋,待展開至規(guī)定距離(般為10～15cm),

　　取出薄層板，晾干，按各品種項(xiàng)下的規(guī)定檢測。

　　(4) 如需用薄層掃描儀對色譜斑點(diǎn)作掃描檢出，或直接在薄層上對色譜斑點(diǎn)作掃描

　　定量，則可用薄層掃描法。

　　薄層掃描的方法，除另有規(guī)定外，可根據(jù)各種薄層掃描儀的結(jié)構(gòu)點(diǎn)及使用說明，

　　結(jié)合具體情況，選擇吸收法或熒光法，用雙波長或單波長掃描。由于影響薄層掃描結(jié)果

　　的因素很多，故應(yīng)在保證供試品的斑點(diǎn)在定濃度范圍內(nèi)呈線性的情況下，將供試品與

　　對照品在同塊薄層上展開后掃描，行并計(jì)算定量，以減少誤差。各種供試品，

　　只有得到分離度和重現(xiàn)性好的薄層色譜，才能獲得滿意的結(jié)果。

　　洗脫后測定法

　　薄層經(jīng)展開后用刮刀或捕集器將斑點(diǎn)的吸附劑捕集后，再用適當(dāng)有機(jī)溶劑洗脫，然后用可見、紫外分光光度法、熒光分光光度法測定含量。

　　但樣品斑點(diǎn)不能噴顯色劑，以免影響不測定，斑點(diǎn)位置的確定方法。

　　樣品在紫外線下發(fā)射熒光的，可在紫外燈下觀察斑點(diǎn)并用針劃去斑點(diǎn)位置。

　　用碘蒸汽顯色，在組分處理出棕色斑點(diǎn)(碘吸附后會(huì)揮發(fā))。

　　用標(biāo)準(zhǔn)物對照，將標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)于邊上測顯色時(shí)，蓋住樣品，定出斑點(diǎn)位置。